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大鼠及小鼠胫骨/股骨不脱钙骨切片制作、染色及分析
时间:2019-10-17作者:biolead来源:biolead关注:

一、不脱钙骨切片的应用

不脱钙骨切片能更好地保持细胞结构,使观察的骨组织结构及其成分不失真,为研究骨组织成分、骨形成及骨形态计量学提供保证;并且可区别矿化骨和类骨质,用于诊断和测量骨矿化过程的异常。

二、仪器

本实验的半薄切片机可以直接制作5μm的切片,不需要进行磨片,因此对组织浪费少。本实验室的LeicaDM6000B生物显微镜及LeicaQWin图像分析系统,可以进行骨形成与骨吸收指标的检测。

半薄切片机    

Leica DM6000B生物显微镜和分析系统

三、检测标本及相关事项

1、可检测的标本:本实验室可以检测的标本是大鼠/小鼠胫骨、股骨。

2、本实验室制作切片的优点与缺点:

优点:

1)抗原的活性损失小:本实验室采用低温包埋技术制作不脱钙骨切片,可以较好的保护抗原的活性,可采用免疫组化的方法进行抗原活性的检测;

2)薄:本实验室制备的切片较薄,厚度可达5μm,可以进行细微结构的观察;

3)制作切片的数量多:采用本实验切片机制作的切片为5μm,不需要进行磨片,因此对组织浪费少,每个大鼠胫骨可制作10张切片,小鼠胫骨可制作5张切片;

4)制片成功率高:本实验室制片成功率可达90%以上。

缺点:

1)小体积样品:受切片机的限制,只能进行小组织的切片的制作,如大鼠股骨、胫骨;

2)时间长:由于本实验室采用低温包埋技术制作不脱钙骨切片,所以制片时间较长,制片时间周期为3个月。

四、收费标准

1、切片制作:

1)大鼠标本:770元/样品(含2张切片,一张白片用于检测MAR、mAR,另一张进行甲苯胺蓝染色以检测TBV%、TRS%、TFS%、OSW、),30个样品起做。

2)小鼠标本:1100元/样品(含2张切片,一张白片用于检测MAR、mAR,另一张进行甲苯胺蓝染色以检测TBV%、TRS%、TFS%、OSW、),30个样品起做。

2、拍照:

明场:22元/样本(包括50倍,100倍,400倍各一张)

荧光:荧光染料需要在动物处死前标记好,其中标记一种荧光染料的拍摄图像一张20元/样元,标记二种荧光染料可拍摄图像各一张30元/样品,倍数自定一种,图像质量的好坏与荧光染料的标记有关。

3、图像分析:

本实验室可以进行以下指标的检测:骨小梁面积百分比(TBV%)、骨小梁吸收表面百分比(TRS%)、骨小梁形成表面百分比(TFS%)、类骨质平均宽度(OSW)、骨小梁矿化率(MAR)、骨皮质矿化率(mAR)。这些指标可以反映骨形成与骨吸收的情况。每个指标分析周期为10个工作日,全套指标(共6项)价格可优惠至260元/样本。

每项指标所反应的意义如下:

(1)骨小梁面积百分比(TBV%):骨小梁面积占被测骨髓腔总面积的百分比,55元/样本;

(2)骨小梁吸收表面百分比(TRS%):不规则、凹凸不平的骨小梁表面占骨小梁表面的百分比,55元/样本;

(3)骨小梁形成表面百分比(TFS%):有成骨细胞被覆的类骨质表面占骨小梁表面的百分比,55元/样本;

(4)类骨质平均宽度(OSW):皮质内表面有成骨细胞被覆的类骨质的平均宽度,50元/样本;

(5)骨小梁矿化率(MAR):骨小梁表面荧光双标记带的平均距离除以两次标记相隔的天数,可反映骨小梁矿化速度,88元/样本;

(6)骨皮质矿化率(mAR):皮质内表面荧光双标记带的平均距离除以两次标记相隔的天数,可反映皮质骨矿化速度,88元/样本。

五、典型图片

本室制备的不脱钙骨切片的代表性图片(甲苯胺蓝染色法及荧光标记)

大鼠皮质骨上的类骨质 

大鼠胫骨骨小梁 

皮质骨的荧光双标记带  

骨小梁的荧光双标记带

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