服务热线
400-650-8846
从技术上说，IHC和ICC实验并不难，然而，每个实验又有那么多的变量需要鉴定和优化。若运气不佳，实验结果不太好，那么我们可能要做个troubleshooting，看看问题到底出在哪儿。下表就列出了IHC/ICC实验的常见问题，以及相应的对策。
问题1：缺乏染色
|
可能原因 |
对策 |
|
缺乏抗原 |
通过原位杂交检查蛋白表达。 |
|
因储存不当，抗体不起作用 |
按照说明书上的说明储存。一般来说，将抗体分装成小份，足够单次实验使用。将这些抗体储存在手动除霜的冰箱中（-20 to -70 °C），避免反复冻融。 |
|
一抗或二抗失活 |
独立检测报告系统，以评估试剂是否有用。 |
|
组织固定不足 |
尝试增加固定时间或换一种固定剂。 |
|
组织过度固定 |
减少浸润或固定后步骤的持续时间。如果浸润固定无法避免，那么通过抗原修复试剂，让抗原不被遮蔽。 |
|
一抗与二抗不兼容 |
使用能与一抗相互作用的二抗。例如，如果一抗来自兔子，那么就使用抗兔的二抗。 |
|
在固定或包埋过程中表位已改变 |
通过各种抗原修复技术尝试恢复免疫反应性。在58°C或以下包埋组织。 |
|
抗原修复不起作用 |
增加处理时间或改变处理溶液。 |
|
试剂遗漏或顺序不对 |
重复染色过程，确认使用了正确的试剂，并以正确顺序添加。 |
问题2：高背景
|
可能原因 |
对策 |
|
一抗或二抗的浓度高 |
滴定抗体，以确定促进一抗和二抗的特异反应所需的最佳浓度。 |
|
组织中抗体和蛋白的疏水相互作用 |
降低抗体稀释液的离子强度（特别是单克隆抗体）。 |
|
一抗或二抗与组织的非特异结合 |
在一抗孵育之前采用封闭步骤（通常使用1% BSA和10% 正常驴血清）。脱脂奶粉也是个选择。 |
|
二抗的非特异结合 |
使用交叉反应性IgG被去除的抗体。 |
|
组织变干 |
在染色过程中避免让组织变干。 |
|
离子相互作用引起的背景 |
提高稀释液的离子强度。 |
问题3：细胞/组织形态被破坏
|
可能原因 |
对策 |
|
抗原修复方法太过剧烈 |
根据经验确定实验条件，既能保留组织形态，又能恢复抗原的免疫反应性 |
|
组织切片从玻片上脱落 |
增加固定时间。根据经验确定另一种固定剂。 |
|
组织切片撕裂或折叠。切片下有气泡 |
重新切片，或在分析结果时忽略受损区域。 |
|
组织形态的分辨率差 |
切出更薄的组织切片。冰晶可能会破坏冰冻切片的形态。 |
|
固定不足在染色过程中会导致组织或细胞受损 |
延长固定时间。提高固定剂/组织的比例。切出更小的组织，以便更彻底的浸润。 |
|
组织自溶导致坏死碎片的染色 |
延长固定时间、比例。考虑使用交联的固定剂。 |
问题4：染色不当
|
可能原因 |
对策 |
|
固定方法不当 |
尝试另一种固定剂，或延长固定时间。 |
|
抗原修复可能不当 |
尝试另一种抗原修复条件。 |
|
抗原的静电荷被改变 |
尝试调整抗体稀释液的pH或阳离子浓度。 |
|
固定拖延导致抗原扩散 |
快速固定组织。尝试交联固定剂，而不是有机固定剂。 |
下一篇：免疫组化笔
即时响应 客户需求
正品行货 值得信赖
发货迅速 快速物流
退换保障 品质无忧
发票保障 售后无忧
9:00-17:00 全国售后服务热线
版权所有 © 北京博蕾德生物科技有限公司 ICP备案号：京ICP备07009776号-1
