| 产品名称 |
货号 |
规格 |
应用 |
| PLT VASP/P2Y12 |
7014 |
10T |
利用双染流式细胞术，通过VASP的磷酸化作用，测定P2Y12受体活性。 |
1 简介：
血管扩张刺激磷蛋白（VASP）是一种重要的细胞内血小板蛋白，基础状态下处于非磷酸化状态。其磷酸化，是受cAMP (环磷酸腺苷) 级联调节。前列腺素E1(PGE1)会激活级联反应，然而这种级联调节通过P2Y12蛋白受体被ADP抑制。
在检测时，VASP的磷酸化与P2Y12受体抑制效应密切相关，而VASP的非磷酸化状态与P2Y12 受体激活相关。
噻氯匹定和氯吡格雷对血小板受体的抑制作用是不可逆的。这种效应通过PGE1的激活，同时ADP的加入，而使VASP保持磷酸化，而被证实。
本试剂盒利用双色流式细胞测定术，通过VASP的磷酸化状态的测定，从而检测P2Y12受体活性。
2 方法：
先将全血单独与PGE1孵育或与PGE1+ADP混合孵育。细胞渗透后，处于磷酸化状态的VASP通过间接免疫荧光反应特异性的被单克隆抗体标记。使用双色流式细胞分析测定单独PGE1激活的和PGE1联合ADP处理管的校准平均荧光强度（mean fluorescence intensities,MF1），经减去空白对照得到校正后的MFIc，即减去阴性对照之后的平均荧光强度。再计算血小板反应指数（Platelet reactivity index，PRI），即VASP磷酸化水平，评估标本中ADP抑制VASP磷酸化的程度。
3 试剂组成
| 名称 |
组分 |
| Reagent 1 |
1x 60ml 瓶，稀释液。 |
| Reagent 2a |
1 x 100ul瓶，PGE1。 |
| Reagent 2b |
1 x 200ul瓶，PGE1 + ADP |
| Reagent 3 |
1 x 300ul 瓶，固定剂 |
| Reagent 4a |
1 x 200ul 瓶，抗VASP-P 小鼠单抗+渗透剂 |
| Reagent 4b |
1 x 100ul 瓶，阴性同型对照（小鼠单抗）+渗透剂 |
| Reagent 5 |
1 x 300ul 瓶，染液，FITC 标记抗小鼠IgG多抗+血小板复染试剂
（抗CD61-PE标记）+渗透剂 |
注：提供Reagent 2a和Reagent 2b是过剩的。
4 需要自备的试剂
1）旋涡混匀器
2）计时器
3）流式细胞仪
4）移液器、枪头
5）上样管
5 试剂制备及保存
未开封包装的试剂可在2-8℃条件下，至包装上注明的有效期内。
注：忌冷冻。
所有试剂为即用型试剂，开封后，无污染的条件下，2-8℃可保持稳定性2月。
注意：
1）Reagent 3中含有2%-5%的多聚甲醛，吸入或皮肤接触会引起过敏。请按要求安全操作。
2）所有试剂包含叠氮钠(0.09%)防腐剂,请按要求操作，当皮肤接触到相关试剂时，用大量水彻底冲洗。
