骨吸收实验(Boneslice 骨切片操作流程)

简介：

该方法提供一种易于检测的定量方案，用于体外测定破骨细胞介导的骨吸收。破骨细胞接种于骨切片上，吸收坑的形成可以通过甲苯胺蓝染色进行定量。

实验材料和试剂：

1. 破骨细胞
2. 骨切片
3. 异丙醇
4. 甲苯胺蓝（Sigma cat#198161）
5. 超纯水
6. 96孔细胞培养板（Greiner , Cat#650185）

实验设备：

1. 骨形态测量系统(http://www.osteometrics.com/product_info.htm)
2. 超声波清洗器

操作流程：

1. 破骨细胞接种于（250000 细胞/孔）含和不含颅骨成骨细胞的96孔细胞培养板上（提前孔内放置骨切片）。
2. 细胞在合适的培养基中37℃培养至少14天。
3. 此后，用PBS洗涤细胞两次，在250ul 70%异丙醇中，用超声波高功率处理至少15分钟，使细胞从骨切片脱落。
4. 250ul 70%异丙醇处理使细胞更容易从骨切片脱落。
4. 加入100ul 甲苯胺蓝溶液（1%溶解于水），室温染色2分钟。
5. 用250ul 超纯水冲洗骨切片至少5次，以洗掉切片上的残留物。
6. 吸收坑被染成深蓝色（图1），吸收坑面积可以通过骨测量系统进行量化或者吸收坑可通过光学显微镜观察计数。

参考文献：（以上流程来源于参考文献，仅供参考）
Scholtysek, C., Katzenbeisser, J., Fu, H., Uderhardt, S., Ipseiz, N., Stoll, C., Zaiss, M. M.,
Stock, M., Donhauser, L., Bohm, C., Kleyer, A., Hess, A., Engelke, K., David, J. P.,
Djouad, F., Tuckermann, J. P., Desvergne, B., Schett, G. and Kronke, G. (2013).
PPARbeta/delta governs Wnt signaling and bone turnover. Nat Med 19(5): 608-613.

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品牌	英文名称	中文名称	货号	规格
Bone slice	Bone Slice	骨切片	250	50片（200um）
Bone slice	Bone Slice	骨切片	200	50片（400um）
IDS	Bone slice	骨切片	DT-1BON1000-96	50片（200um）