WKY大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎（EAG）模型诱导方案

发布者：北京博蕾德生物发布时间：2025-08-28 分享到：

WKY大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎（EAG）模型诱导方案

简介：
　　Goodpasture's syndrome综合征是一种自身免疫性疾病，可引发急进性肾小球（RPDN）和肺出血，其发病机制由针对肾小球和肺泡基底膜的自身抗体介导。IV型胶原作为肾小球基底膜（GBM）的主要成分，由五条α(IV)链[a1(IV)至a5(IV)]构成。其中IV型胶原a3链的非胶原结构域（a3(IV)NC1）被确认为人类Goodpasture's syndrome综合征的主要抗原。

实验性自身免疫性肾小球肾炎（EAG）作为该综合征的临床模型，可通过以下抗原在Wistar Kyoto（WKY）大鼠中诱导：
1)异源/同源GBM
2)IV型胶原NC1片段
3)纯化牛源α3(IV)NC1
4)重组人源α3(IV)NC1及α4(IV)NC1
5)人源α3(IV)NC1合成肽段
研究证实，大鼠的Goodpasture's syndrome综合征抗原定位于α3(IV)NC1和α4(IV)NC1。EAG还可通过转移肾病WKY大鼠的自身抗体或α3(IV)NC1肽段特异性T细胞诱导于正常WKY大鼠，表明抗GBM抗体与抗原特异性T细胞在EAG发病机制中具有独立作用。

Chondrex公司提供的牛源IV型胶原NC1片段（货号1102，1mg）源自胶原酶溶解的牛GBM，可作为诱导WKY大鼠EAG的抗原之一。同时提供：
1）大鼠尿蛋白检测试剂盒（货号9040）：用于EAG模型16小时尿总蛋白定量。
2）BPB蛋白检测试剂盒（货号6026）：蛋白尿评估。
3）肌酐检测试剂盒（货号6041）：用于蛋白尿/白蛋白尿数据的标准化校正。

EAG模型诱导方案：
1.实验动物
选用7-8周龄或更年长的WKY大鼠。需注意：不同亚系、供应商或饲养设施来源的WKY大鼠对EAG的敏感性存在差异。

2.抗原制备
将1瓶IV型胶原NC1片段（货号1102，1mg）溶解于1ml 0.05M磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.4）中，配制成1mg/ml溶液。

3.乳化处理
将等体积的NC1片段溶液与完全弗氏佐剂（货号7008，含1mg/ml结核分枝杆菌）混合乳化。

注意事项：乳化稳定性检测：取1滴乳化液滴入烧杯水中。
合格标准：乳化液保持完整团块状浮于水面不分散。
不合格处理：若乳化液在水面扩散，需补加数滴佐剂重新乳化。

4. 免疫接种
初次免疫：于大鼠尾根部皮下注射0.2ml乳剂（含0.1mg NC1片段）
加强免疫（适用于低反应性大鼠）：第7天，改用不完全弗氏佐剂（货号7008）制备乳剂
剂量与部位同初次免疫。
特别提示：
不同供应商来源的同一品系大鼠对肾炎易感性存在差异，研究者需根据实际情况优化免疫方案（包括免疫周期和剂量）

5. EAG模型评估
观察周期：建议持续观察至第35天。
检测方法：
每周进行16小时蛋白尿检测（推荐使用Chondrex大鼠尿蛋白检测试剂盒，货号9040）。
典型病程：易感WKY大鼠通常在14-21天出现蛋白尿，21-28天达到蛋白尿峰值。

牛源NC1片段免疫诱导的WKY大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎
7 周龄雌性 WKY 大鼠，于第 0 天经尾根部皮下注射 100μg 牛源 NC1 片段（cat#号 1102）与完全弗氏佐剂（CFA，cat#7008，含 1 mg/ml 结核分枝杆菌）的乳化液。实验大鼠于第 10天出现蛋白尿，并持续至第 28 天。

相关产品信息：

品牌	货号	产品名称	中文名称	规格
Chondrex	1102	NC1 Fragment of Bovine GBM Type IV Collagen	牛肾小球基底膜IV型胶原NC1片段	1mg
Chondrex	7008	CFA	完全弗氏佐剂(1mg/ml)	5ml
Chondrex	9040	Rat Urinary Protein Assay Kit	大鼠尿蛋白检测试剂盒	1Kit
Chondrex	6026	Bromophenol Blue (BPB) Protein Assay Kit	溴酚蓝（BPB）蛋白检测试剂盒	1Kit
Chondrex	6041	Creatinine Assay Kit	肌酐检测试剂盒	1Kit