Fina Biosolutions EcoCRM®重组CRM197载体蛋白

发布者：北京博蕾德生物发布时间：2026-09-03 分享到：

从多糖疫苗到多肽免疫：CRM197 载体蛋白的选择与应用
Fina Biosolutions EcoCRM® 重组CRM197 载体蛋白

　　在疫苗研发和抗体制备中，有一类分子常常被忽视却至关重要-载体蛋白（Carrier Protein）。多糖、寡糖、小分子半抗原本身免疫原性弱，属T细胞非依赖性抗原，单独免疫难以诱导高效、持久的抗体应答。把它们和载体蛋白偶联在一起，就能转化为T细胞依赖性抗原，显著提升免疫原性，诱导免疫记忆。

　　在众多载体蛋白中，CRM197 是目前应用最广泛、临床验证最充分的一个。

CRM197是什么？

　　CRM19是白喉毒素的基因解毒突变体，通过单点突变（G52E）使白喉毒素丧失毒性，但保留了完整的蛋白结构和免疫原性。分子量约58.4kDa。
全球多个已上市结合疫苗都以CRM197为载体，包括：

肺炎链球菌结合疫苗（Prevnar® 系列）
b 型流感嗜血杆菌结合疫苗（Hib）
脑膜炎奈瑟菌结合疫苗

　　这些疫苗的广泛使用，证明了CRM197作为载体蛋白的安全性和有效性。

传统 CRM197的痛点

　　CRM197虽好，但长期以来存在一个现实问题：贵，且产能有限。
　　传统 CRM197 主要有两个来源：

白喉杆菌（Corynebacterium diphtheriae）分泌表达：需要精确控制生长参数，产量低（通常<100 mg/L），放大生产困难。
荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）周质表达：虽然是重组表达，但价格贵。

　　对于研究机构和疫苗开发企业来说，CRM197的成本直接影响结合疫苗的研发进度和最终定价。尤其是在临床前研究阶段，需要大量载体蛋白进行偶联条件优化、动物免疫和稳定性考察，成本压力更为突出。

EcoCRM®：大肠杆菌来源的高性价比 CRM197

　　Fina Biosolutions 针对这一痛点，开发了基于大肠杆菌（E.coli）细胞质表达的CRM197 产品，商品名 EcoCRM®。
　　核心突破在于：以往大肠杆菌表达CRM197往往形成不可溶的包涵体，需要复性，复性效率低且成本高。FinaBio 通过优化表达菌株和密码子序列，实现了 CRM197 在大肠杆菌细胞质中以可溶性、正确折叠的单链形式高表达，发酵产量达到克/升级。配合简单高效的纯化流程，大幅降低了生产成本。

图1. EcoCRM® SDS-PAGE 分析：纯度 >99%，无明显 nicking（蛋白断裂），呈完整单一条带

EcoCRM® 的应用场景

1.多糖/寡糖结合疫苗
将细菌多糖或寡糖偶联到 EcoCRM® 上，从 T 细胞非依赖抗原转为 T 细胞依赖抗原，诱导高滴度、高亲和力抗体，并产生免疫记忆。典型应用包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、伤寒沙门菌（COPS）等结合疫苗。已有研究表明，伤寒沙门菌 COPS-EcoCRM® 结合物在动物模型中提供 100% 保护。

2. 多肽结合疫苗
多肽分子量小、免疫原性弱，偶联到载体蛋白后可显著增强免疫应答。EcoCRM® 已用于疟疾疫苗（Pfs25 蛋白偶联）、Burkholderia 外膜蛋白多肽疫苗等研究。

3.半抗原/小分子结合疫苗
用于药物滥用治疗疫苗（如羟考酮、阿片类）、毒素类疫苗等。小分子本身无法被免疫系统识别，偶联到载体蛋白后才能诱导中和抗体。

图2 .半抗原结合物免疫原性对比：
Hapten-EcoCRM® 组诱导的抗半抗原 IgG 滴度显著高于 Hapten-KLH 组（*p<0.05）证明 EcoCRM® 作为载体蛋白优于传统 KLH

4.抗体制备与免疫原
在实验室制备针对多肽、半抗原或小分子的抗体时，EcoCRM® 是理想的载体蛋白选择，可替代传统的 KLH（钥孔戚血蓝蛋白）。

5.研究用结合物构建与条件优化
由于性价比高，EcoCRM® 特别适合在临床前研究阶段用于偶联条件摸索、免疫剂量探索和稳定性考察，不必在优化阶段就投入高昂的载体蛋白成本。

EcoCRM® 的产品优势

1. 高纯度、完整单链
SDS-PAGE 显示纯度 > 95%，SEC-HPLC 显示二聚体 < 0.6%；质谱确认分子量 58,413 Da，与天然序列（58,412 Da）一致；无 nicking（蛋白断裂），完整单链多肽。

图3. EcoCRM® SEC-HPLC 分析：单一尖锐主峰，二聚体及聚集体 < 0.6%，证明产品以单体形式存在且纯度高

图4 .EcoCRM® MALDI-TOF 质谱分析：分子量 59,004 Da，呈单一峰，证明蛋白完整、无降解或断裂

2. 优异的溶解性
可在 PBS 中浓缩至＞30 mg/mL，无沉淀或寡聚化；低浓度和高浓度下均保持单体状态，偶联反应时浓度选择灵活。

3. 良好的稳定性
4℃储存 60天，无明显降解；-80℃加冷冻保护剂长期保存，解冻后仍保持单体；批次间一致性好。

4. 免疫原性与传统CRM197相当
糖肽-EcoCRM® 结合物免疫兔，抗糖肽 IgG 滴度与 Pfenex 来源 CRM197 相当；疟疾 Pfs25-EcoCRM® 结合物在小鼠中诱导的抗体可高效阻断疟原虫蚊胃传播（标准膜饲实验 SMFA 抑制率 99.8–100%）。

5.优于KLH 作为载体蛋白
KLH（钥孔戚血蓝蛋白）是实验室常用载体，但存在来源受限（海螺血液）、分子量大且结构不明确、低离子强度下溶解性差、结合物难以质控等问题。EcoCRM® 的优势：

免疫原性等于或优于 KLH 结合物（见图2）
结合物可通过 SDS-PAGE 和 MALDI-TOF 质谱精确表征
重组蛋白，批次稳定，可扩大生产

图5.CRM197 马来酰亚胺活化前后 MALDI-TOF 质谱：CRM197（58,413 Da）→ CRM197-maleimide（62,525 Da），分子量增加约 4,100 Da，对应约 20 个赖氨酸被活化，证明 EcoCRM® 可高效进行化学活化与偶联

6. 性价比高
大肠杆菌高表达，显著降低的生产成本。对于需要大量载体蛋白的研究项目和疫苗开发，成本优势明显。

7. cGMP 级与研究级均有供应

研究级（Research Grade）：适用于基础研究、临床前开发
cGMP 级：适用于临床试验和商业化疫苗生产

产品信息

品牌	产品名称	规格	说明
Fina Biosolutions	EcoCRM® (CRM197)	1 mg	研究级，可溶性重组 CRM197
Fina Biosolutions	EcoCRM® (CRM197)	5 mg	研究级
Fina Biosolutions	EcoCRM® (CRM197)	10 mg	研究级
Fina Biosolutions	EcoCRM® (CRM197)	25 mg	研究级
Fina Biosolutions	EcoCRM® (CRM197)	50 mg	研究级
Fina Biosolutions	cGMP EcoCRM® (CRM197)	按需咨询	cGMP 级，适用于临床及商业化
Fina Biosolutions	Ready-to-Conjugate™ CRM-maleimide	按需咨询	预活化载体蛋白，简化偶联操作